ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് ചെയിൻ റിയാക്ഷന്റെ ഉപജ്ഞാതാവും നോബൽ സമ്മാന ജേതാവുമായ കാരി മുള്ളിസ് അന്തരിച്ചു

അമേരിക്കയിലെ രസതന്ത്ര നൊബേൽ ജേതാവ് കാരി മുള്ളിസ് (74) കാലിഫോർണിയയിൽ അന്തരിച്ചു. ഓഗസ്റ്റ് 7 നാണ് മരണം സംഭവിച്ചതെന്ന് ഭാര്യ പറയുന്നു. ന്യുമോണിയ മൂലം ഹൃദയവും ശ്വാസോച്ഛ്വാസവും തകരാറിലായതാണ് കാരണം.

ഡിഎൻഎ തന്മാത്രയുടെ കണ്ടുപിടുത്തക്കാരനായ ജെയിംസ് വാട്സൺ തന്നെ ബയോകെമിസ്ട്രിയിൽ അദ്ദേഹം നൽകിയ സംഭാവനകളെക്കുറിച്ചും നോബൽ സമ്മാനം ലഭിച്ചതിനെക്കുറിച്ചും നമ്മോട് പറയും.

ജെയിംസ് വാട്സൺ, ആൻഡ്രൂ ബെറി, കെവിൻ ഡേവിസ് എന്നിവരുടെ പുസ്തകത്തിൽ നിന്നുള്ള ഉദ്ധരണി

ഡിഎൻഎ. ജനിതക വിപ്ലവത്തിന്റെ ചരിത്രം

അധ്യായം 7. മനുഷ്യ ജീനോം. ജീവിത രംഗം

പങ്ക് € |
പോളിമറേസ് ചെയിൻ റിയാക്ഷൻ (പിസിആർ) 1983-ൽ സെറ്റസിൽ ജോലി ചെയ്തിരുന്ന ബയോകെമിസ്റ്റ് കാരി മുള്ളിസ് കണ്ടുപിടിച്ചതാണ്. ഈ പ്രതികരണത്തിന്റെ കണ്ടെത്തൽ വളരെ ശ്രദ്ധേയമായിരുന്നു. മുള്ളിസ് പിന്നീട് അനുസ്മരിച്ചു: “1983 ഏപ്രിലിലെ ഒരു വെള്ളിയാഴ്ച വൈകുന്നേരം എനിക്ക് ഒരു എപ്പിഫാനി ഉണ്ടായിരുന്നു. റെഡ്‌വുഡ് വനങ്ങളുടെ നാടായ വടക്കൻ കാലിഫോർണിയയിലെ ചന്ദ്രപ്രകാശമുള്ള, വളഞ്ഞുപുളഞ്ഞ പർവത പാതയിലൂടെയാണ് ഞാൻ ചക്രത്തിന് പിന്നിൽ ഓടുന്നത്. അത്തരമൊരു സാഹചര്യത്തിലാണ് അദ്ദേഹത്തിന് പ്രചോദനം ലഭിച്ചത് എന്നത് ശ്രദ്ധേയമാണ്. വടക്കൻ കാലിഫോർണിയയിൽ ഉൾക്കാഴ്ച പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുന്ന പ്രത്യേക റോഡുകൾ ഉണ്ടെന്നല്ല; മഞ്ഞുമൂടിയ ഇരട്ടപ്പാതയിലൂടെ മുള്ളിസ് അശ്രദ്ധമായി അതിവേഗം പായുന്നത് അവന്റെ സുഹൃത്ത് ഒരിക്കൽ കണ്ടു, അത് അവനെ ഒട്ടും ബുദ്ധിമുട്ടിച്ചില്ല. ഒരു സുഹൃത്ത് ന്യൂയോർക്ക് ടൈംസിനോട് പറഞ്ഞു: “ഒരു റെഡ്വുഡ് മരത്തിൽ ഇടിച്ച് മരിക്കുമെന്ന് മുള്ളിസിന് ഒരു ദർശനം ഉണ്ടായിരുന്നു. അതിനാൽ, റോഡരികിൽ ചുവന്ന മരങ്ങൾ വളരുന്നില്ലെങ്കിൽ വാഹനമോടിക്കുമ്പോൾ അയാൾ ഒന്നിനെയും ഭയപ്പെടുന്നില്ല. റോഡരികിലെ റെഡ്‌വുഡുകളുടെ സാന്നിധ്യം മുള്ളിസിനെ കേന്ദ്രീകരിക്കാൻ നിർബന്ധിതനാക്കി... ഇതാ, ഒരു ഉൾക്കാഴ്ച. 1993-ൽ തന്റെ കണ്ടുപിടുത്തത്തിന് രസതന്ത്രത്തിനുള്ള നൊബേൽ സമ്മാനം മുള്ളിസിന് ലഭിച്ചു, അതിനുശേഷം അദ്ദേഹത്തിന്റെ പ്രവർത്തനങ്ങളിൽ കൂടുതൽ അപരിചിതനായി. ഉദാഹരണത്തിന്, എയ്ഡ്‌സിന് എച്ച്‌ഐവിയുമായി ബന്ധമില്ല എന്ന റിവിഷനിസ്റ്റ് സിദ്ധാന്തത്തിന്റെ പിന്തുണക്കാരനാണ് അദ്ദേഹം, ഇത് അദ്ദേഹത്തിന്റെ സ്വന്തം പ്രശസ്തിയെ ഗണ്യമായി ദുർബലപ്പെടുത്തുകയും ഡോക്ടർമാരുമായി ഇടപെടുകയും ചെയ്തു.

PCR വളരെ ലളിതമായ ഒരു പ്രതികരണമാണ്. ഇത് നടപ്പിലാക്കാൻ, ആവശ്യമായ ഡിഎൻഎ ശകലത്തിന്റെ വ്യത്യസ്ത സ്ട്രോണ്ടുകളുടെ വിപരീത അറ്റങ്ങൾക്ക് പൂരകമായ രണ്ട് രാസപരമായി സമന്വയിപ്പിച്ച പ്രൈമറുകൾ ആവശ്യമാണ്. പ്രൈമറുകൾ ഒറ്റ സ്ട്രാൻഡഡ് ഡിഎൻഎയുടെ ചെറിയ ഭാഗങ്ങളാണ്, ഓരോന്നിനും ഏകദേശം 20 അടിസ്ഥാന ജോഡികൾ നീളമുണ്ട്. പ്രൈമറുകളുടെ പ്രത്യേകത, അവ വർദ്ധിപ്പിക്കേണ്ട ഡിഎൻഎ വിഭാഗങ്ങളുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നു എന്നതാണ്, അതായത് ഡിഎൻഎ ടെംപ്ലേറ്റ്.

(ചിത്രം ക്ലിക്ക് ചെയ്യാവുന്നത്) കാരി മുള്ളിസ്, PCR ന്റെ കണ്ടുപിടുത്തക്കാരൻ

പിസിആറിന്റെ പ്രത്യേകത, ടെംപ്ലേറ്റിനും പ്രൈമറുകൾക്കും ഇടയിലുള്ള കോംപ്ലിമെന്ററി കോംപ്ലക്സുകളുടെ രൂപീകരണത്തെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതാണ്, ഹ്രസ്വ സിന്തറ്റിക് ഒലിഗോ ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകൾ. ഓരോ പ്രൈമറുകളും ഡബിൾ സ്‌ട്രാൻഡഡ് ടെംപ്ലേറ്റിന്റെ ഒരു സ്‌ട്രാൻഡുമായി പൂരകമാണ്, കൂടാതെ ആംപ്ലിഫൈഡ് മേഖലയുടെ തുടക്കവും അവസാനവും പരിമിതപ്പെടുത്തുന്നു. വാസ്തവത്തിൽ, തത്ഫലമായുണ്ടാകുന്ന "മാട്രിക്സ്" ഒരു മുഴുവൻ ജീനോമാണ്, അതിൽ നിന്ന് നമുക്ക് താൽപ്പര്യമുള്ള ശകലങ്ങൾ വേർതിരിച്ചെടുക്കുക എന്നതാണ് ഞങ്ങളുടെ ലക്ഷ്യം. ഇത് ചെയ്യുന്നതിന്, ഡിഎൻഎ സ്ട്രോണ്ടുകളെ വേർതിരിക്കുന്നതിന് ഇരട്ട-സ്ട്രാൻഡഡ് ഡിഎൻഎ ടെംപ്ലേറ്റ് 95 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ നിരവധി മിനിറ്റ് ചൂടാക്കുന്നു. രണ്ട് ഡിഎൻഎ സ്ട്രോണ്ടുകൾക്കിടയിലുള്ള ഹൈഡ്രജൻ ബോണ്ടുകൾ തകർന്നതിനാൽ ഈ ഘട്ടത്തെ ഡിനാറ്ററേഷൻ എന്ന് വിളിക്കുന്നു. സ്ട്രോണ്ടുകൾ വേർപിരിഞ്ഞുകഴിഞ്ഞാൽ, പ്രൈമറുകൾ സിംഗിൾ-സ്ട്രാൻഡഡ് ടെംപ്ലേറ്റുമായി ബന്ധിപ്പിക്കാൻ അനുവദിക്കുന്നതിന് താപനില കുറയ്ക്കുന്നു. ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് ന്യൂക്ലിയോടൈഡ് ശൃംഖലയുമായി ബന്ധിപ്പിച്ച് ഡിഎൻഎ പകർപ്പ് ആരംഭിക്കുന്നു. ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് എന്ന എൻസൈം ഒരു പ്രൈമർ അല്ലെങ്കിൽ പകർത്തുന്നതിനുള്ള ഉദാഹരണമായി ടെംപ്ലേറ്റ് സ്ട്രാൻഡിനെ പകർത്തുന്നു. ആദ്യ സൈക്കിളിന്റെ ഫലമായി, ഒരു നിശ്ചിത ഡിഎൻഎ വിഭാഗത്തിന്റെ ഒന്നിലധികം തുടർച്ചയായ ഇരട്ടിപ്പിക്കൽ നമുക്ക് ലഭിക്കും. അടുത്തതായി ഞങ്ങൾ ഈ നടപടിക്രമം ആവർത്തിക്കുന്നു. ഓരോ സൈക്കിളിനും ശേഷം നമുക്ക് ഇരട്ട അളവിൽ ഒരു ടാർഗെറ്റ് ഏരിയ ലഭിക്കും. ഇരുപത്തിയഞ്ച് പിസിആർ സൈക്കിളുകൾക്ക് ശേഷം (അതായത്, രണ്ട് മണിക്കൂറിനുള്ളിൽ), ഒറിജിനലിനേക്കാൾ 225 മടങ്ങ് ഉയർന്ന തുകയിൽ ഞങ്ങൾക്ക് താൽപ്പര്യമുള്ള ഡിഎൻഎ മേഖലയുണ്ട് (അതായത്, ഞങ്ങൾ ഇത് ഏകദേശം 34 ദശലക്ഷം തവണ വർദ്ധിപ്പിച്ചു). വാസ്തവത്തിൽ, ഇൻപുട്ടിൽ ഞങ്ങൾക്ക് പ്രൈമറുകൾ, ടെംപ്ലേറ്റ് ഡിഎൻഎ, ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് എൻസൈം, എ, സി, ജി, ടി എന്നീ സ്വതന്ത്ര ബേസുകളുടെ മിശ്രിതം ലഭിച്ചു, ഒരു നിർദ്ദിഷ്ട പ്രതിപ്രവർത്തന ഉൽപ്പന്നത്തിന്റെ അളവ് (പ്രൈമറുകളാൽ പരിമിതപ്പെടുത്തിയത്) ഗണ്യമായി വർദ്ധിക്കുന്നു, കൂടാതെ സംഖ്യയും "നീണ്ട" ഡിഎൻഎ പകർപ്പുകൾ രേഖീയമാണ്, അതിനാൽ പ്രതികരണ ഉൽപ്പന്നങ്ങളിൽ ആധിപത്യം പുലർത്തുന്നു.

ആവശ്യമുള്ള ഡിഎൻഎ വിഭാഗത്തിന്റെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ: പോളിമറേസ് ചെയിൻ പ്രതികരണം

പിസിആറിന്റെ ആദ്യകാലങ്ങളിൽ, പ്രധാന പ്രശ്നം ഇനിപ്പറയുന്നവയായിരുന്നു: ഓരോ തപീകരണ-തണുപ്പിക്കൽ സൈക്കിളിന് ശേഷവും, ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് പ്രതികരണ മിശ്രിതത്തിലേക്ക് ചേർക്കേണ്ടതുണ്ട്, കാരണം ഇത് 95 ° C താപനിലയിൽ നിർജ്ജീവമാക്കിയിരുന്നു. അതിനാൽ, 25 സൈക്കിളുകളിൽ ഓരോന്നിനും മുമ്പായി ഇത് വീണ്ടും ചേർക്കേണ്ടത് ആവശ്യമാണ്. പ്രതികരണ നടപടിക്രമം താരതമ്യേന കാര്യക്ഷമമല്ല, ധാരാളം സമയവും പോളിമറേസ് എൻസൈമും ആവശ്യമാണ്, മെറ്റീരിയൽ വളരെ ചെലവേറിയതായിരുന്നു. ഭാഗ്യത്തിന് പ്രകൃതി മാതാവ് സഹായത്തിനെത്തി. പല മൃഗങ്ങൾക്കും 37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിനേക്കാൾ ഉയർന്ന താപനിലയിൽ സുഖം തോന്നുന്നു. എന്തുകൊണ്ടാണ് 37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസ് നമുക്ക് പ്രധാനമായത്? പിസിആറിനുള്ള പോളിമറേസ് എൻസൈം യഥാർത്ഥത്തിൽ ലഭിച്ച E. coli-യ്ക്ക് ഈ താപനില അനുയോജ്യമാണ് എന്നതിനാലാണ് ഇത് സംഭവിച്ചത്. പ്രകൃതിയിൽ, ദശലക്ഷക്കണക്കിന് വർഷത്തെ സ്വാഭാവിക തിരഞ്ഞെടുപ്പിന്റെ പ്രോട്ടീനുകൾ ഉയർന്ന താപനിലയെ കൂടുതൽ പ്രതിരോധിക്കുന്ന സൂക്ഷ്മാണുക്കൾ ഉണ്ട്. തെർമോഫിലിക് ബാക്ടീരിയയിൽ നിന്നുള്ള ഡിഎൻഎ പോളിമറേസുകൾ ഉപയോഗിക്കാൻ നിർദ്ദേശിക്കപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്. ഈ എൻസൈമുകൾ തെർമോസ്റ്റബിൾ ആയി മാറുകയും നിരവധി പ്രതികരണ ചക്രങ്ങളെ ചെറുക്കാൻ കഴിയുകയും ചെയ്തു. പിസിആർ ലളിതമാക്കാനും ഓട്ടോമേറ്റ് ചെയ്യാനും അവരുടെ ഉപയോഗം സാധ്യമാക്കി. യെല്ലോസ്റ്റോൺ നാഷണൽ പാർക്കിലെ ചൂടുനീരുറവകളിൽ വസിക്കുന്ന തെർമസ് അക്വാട്ടിക്കസ് എന്ന ബാക്ടീരിയയിൽ നിന്ന് വേർതിരിച്ചെടുത്ത ആദ്യത്തെ തെർമോസ്റ്റബിൾ ഡിഎൻഎ പോളിമറേസുകളിൽ ഒന്ന്, ടാക്ക് പോളിമറേസ് എന്ന് നാമകരണം ചെയ്യപ്പെട്ടു.

പിസിആർ പെട്ടെന്നുതന്നെ ഹ്യൂമൻ ജീനോം പ്രോജക്റ്റിന്റെ സൃഷ്ടിയായി. പൊതുവേ, ഈ പ്രക്രിയ മുള്ളിസ് വികസിപ്പിച്ചതിൽ നിന്ന് വ്യത്യസ്തമല്ല, ഇത് ഇപ്പോൾ യാന്ത്രികമാക്കിയിരിക്കുന്നു. പ്ളാസ്റ്റിക് ടെസ്റ്റ് ട്യൂബുകളിലേക്ക് ദ്രാവകത്തിന്റെ തുള്ളികൾ പകരുന്ന മന്ദബുദ്ധിയുള്ള ബിരുദ വിദ്യാർത്ഥികളുടെ ഒരു കൂട്ടത്തെ ഞങ്ങൾ മേലിൽ ആശ്രയിക്കുന്നില്ല. തന്മാത്രാ ജനിതക ഗവേഷണം നടത്തുന്ന ആധുനിക ലബോറട്ടറികളിൽ, റോബോട്ടിക് കൺവെയറുകളിൽ ഈ പ്രവർത്തനം നടത്തുന്നു. ഹ്യൂമൻ ജീനോമിന്റെ അത്രയും വലിപ്പമുള്ള ഒരു സീക്വൻസിംഗ് പ്രോജക്ടിൽ ഉൾപ്പെട്ടിരിക്കുന്ന PCR റോബോട്ടുകൾ വലിയ അളവിലുള്ള ചൂട്-സ്ഥിരതയുള്ള പോളിമറേസ് ഉപയോഗിച്ച് അശ്രാന്തമായി പ്രവർത്തിക്കുന്നു. യൂറോപ്യൻ വ്യാവസായിക ഫാർമസ്യൂട്ടിക്കൽ ഭീമനായ ഹോഫ്മാൻ-ലാറോച്ചെ, PCR പേറ്റന്റിന്റെ ഉടമ, ഉപഭോഗവസ്തുക്കളുടെ വിലയിൽ യുക്തിരഹിതമായി ഉയർന്ന റോയൽറ്റി ചേർത്തതിൽ ഹ്യൂമൻ ജീനോം പദ്ധതിയിൽ പ്രവർത്തിക്കുന്ന ചില ശാസ്ത്രജ്ഞർ പ്രകോപിതരായി.

മറ്റൊരു "ഡ്രൈവിംഗ് തത്വം" ഡിഎൻഎ സീക്വൻസിങ് രീതി തന്നെയായിരുന്നു. ഈ രീതിയുടെ രാസ അടിസ്ഥാനം അക്കാലത്ത് പുതിയതായിരുന്നില്ല: 1970-കളുടെ മധ്യത്തിൽ ഫ്രെഡ് സാംഗർ വികസിപ്പിച്ചെടുത്ത അതേ സമർത്ഥമായ രീതിയാണ് ഇന്റർസ്റ്റേറ്റ് ഹ്യൂമൻ ജീനോം പ്രോജക്റ്റ് (എച്ച്ജിപി) സ്വീകരിച്ചത്. സീക്വൻസിംഗിന് സാധ്യമായ ഓട്ടോമേഷന്റെ തോതിലും അളവിലുമാണ് നവീകരണം.

കാലിഫോർണിയ ഇൻസ്റ്റിറ്റ്യൂട്ട് ഓഫ് ടെക്നോളജിയിലെ ലീ ഹൂഡിന്റെ ലബോറട്ടറിയിലാണ് ഓട്ടോമേറ്റഡ് സീക്വൻസിംഗ് ആദ്യം വികസിപ്പിച്ചെടുത്തത്. മൊണ്ടാനയിലെ ഹൈസ്കൂളിൽ പഠിച്ച അദ്ദേഹം ക്വാർട്ടർബാക്ക് ആയി കോളേജ് ഫുട്ബോൾ കളിച്ചു; ഹൂഡിന് നന്ദി, ടീം ഒന്നിലധികം തവണ സംസ്ഥാന ചാമ്പ്യൻഷിപ്പ് നേടി. അദ്ദേഹത്തിന്റെ ടീം വർക്ക് കഴിവുകളും അദ്ദേഹത്തിന്റെ ശാസ്ത്ര ജീവിതത്തിൽ ഉപയോഗപ്രദമായിരുന്നു. ഹൂഡിന്റെ ലബോറട്ടറിയിൽ രസതന്ത്രജ്ഞർ, ബയോളജിസ്റ്റുകൾ, എഞ്ചിനീയർമാർ എന്നിവരടങ്ങുന്ന ഒരു സംഘമാണ് ഉണ്ടായിരുന്നത്, അദ്ദേഹത്തിന്റെ ലബോറട്ടറി ഉടൻ തന്നെ സാങ്കേതിക കണ്ടുപിടിത്തത്തിൽ ഒരു നേതാവായി മാറി.

വാസ്തവത്തിൽ, ഓട്ടോമേറ്റഡ് സീക്വൻസിങ് രീതി കണ്ടുപിടിച്ചത് ലോയ്ഡ് സ്മിത്തും മൈക്ക് ഹുങ്കപില്ലറും ചേർന്നാണ്. പിന്നീട് ഹൂഡിന്റെ ലബോറട്ടറിയിൽ ജോലി ചെയ്തിരുന്ന മൈക്ക് ഹുങ്കപില്ലർ, ഓരോ തരം ബേസും വ്യത്യസ്തമായി നിറങ്ങൾ നൽകുന്ന മെച്ചപ്പെട്ട സീക്വൻസിങ് രീതിക്ക് വേണ്ടിയുള്ള നിർദ്ദേശവുമായി ലോയ്ഡ് സ്മിത്തിനെ സമീപിച്ചു. അത്തരമൊരു ആശയം സാംഗർ പ്രക്രിയയുടെ കാര്യക്ഷമതയെ നാലിരട്ടിയാക്കും. സാംഗറിൽ, ഓരോ നാല് ട്യൂബുകളിലും (ബേസുകളുടെ എണ്ണം അനുസരിച്ച്) ക്രമപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, ഡിഎൻഎ പോളിമറേസിന്റെ പങ്കാളിത്തത്തോടെ, ഒരു പ്രൈമർ സീക്വൻസ് ഉൾപ്പെടെ, വ്യത്യസ്ത നീളമുള്ള ഒലിഗോ ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകളുടെ ഒരു അതുല്യമായ സെറ്റ് രൂപം കൊള്ളുന്നു. അടുത്തതായി, ചെയിൻ വേർതിരിക്കലിനായി ട്യൂബുകളിൽ ഫോർമൈഡ് ചേർക്കുകയും പോളിഅക്രിലമൈഡ് ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് നാല് പാതകളിൽ നടത്തുകയും ചെയ്തു. സ്മിത്തിന്റെയും ഹങ്കപില്ലറുടെയും പതിപ്പിൽ, ഡിയോക്സിന്യൂക്ലിയോടൈഡുകൾ നാല് വ്യത്യസ്ത ചായങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ച് ലേബൽ ചെയ്യുകയും പിസിആർ ഒരു ട്യൂബിൽ നടത്തുകയും ചെയ്യുന്നു. തുടർന്ന്, പോളിഅക്രിലാമൈഡ് ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് സമയത്ത്, ജെല്ലിലെ ഒരു പ്രത്യേക സ്ഥലത്ത് ഒരു ലേസർ ബീം ഡൈകളുടെ പ്രവർത്തനത്തെ ഉത്തേജിപ്പിക്കുന്നു, കൂടാതെ ഏത് ന്യൂക്ലിയോടൈഡാണ് നിലവിൽ ജെല്ലിലൂടെ മൈഗ്രേറ്റ് ചെയ്യുന്നതെന്ന് ഡിറ്റക്ടർ നിർണ്ണയിക്കുന്നു. ആദ്യം, സ്മിത്ത് അശുഭാപ്തിവിശ്വാസിയായിരുന്നു - വളരെ കുറഞ്ഞ അളവിലുള്ള ഡൈ ഉപയോഗിക്കുന്നത് ന്യൂക്ലിയോടൈഡ് പ്രദേശങ്ങൾ വേർതിരിച്ചറിയാൻ കഴിയാത്തതിലേക്ക് നയിക്കുമെന്ന് അദ്ദേഹം ഭയപ്പെട്ടു. എന്നിരുന്നാലും, ലേസർ സാങ്കേതികവിദ്യയെക്കുറിച്ച് മികച്ച ധാരണ ഉണ്ടായിരുന്നതിനാൽ, ലേസർ വികിരണത്തിന് വിധേയമാകുമ്പോൾ ഫ്ലൂറസ് ചെയ്യുന്ന പ്രത്യേക ഫ്ലൂറോക്രോം ഡൈകൾ ഉപയോഗിച്ച് അദ്ദേഹം താമസിയാതെ ഈ അവസ്ഥയിൽ നിന്ന് ഒരു വഴി കണ്ടെത്തി.

(പൂർണ്ണ പതിപ്പ് ക്ലിക്ക് വഴി - 4,08 MB) ഫൈൻ പ്രിന്റ്: ഒരു ഓട്ടോമാറ്റിക് സീക്വൻസർ ഉപയോഗിച്ച് ഡിഎൻഎ സീക്വൻസ് ക്രമീകരിച്ചത്, ഒരു ഓട്ടോമാറ്റിക് സീക്വൻസിംഗ് മെഷീനിൽ നിന്ന് ലഭിച്ചതാണ്. ഓരോ നിറവും നാല് അടിസ്ഥാനങ്ങളിൽ ഒന്നിനോട് യോജിക്കുന്നു

സാംഗർ രീതിയുടെ ക്ലാസിക് പതിപ്പിൽ, വിശകലനം ചെയ്ത ഡിഎൻഎയുടെ ഇഴകളിൽ ഒന്ന്, ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് എൻസൈം ഉപയോഗിച്ച് ഒരു കോംപ്ലിമെന്ററി സ്ട്രോണ്ടിന്റെ സമന്വയത്തിനുള്ള ഒരു ടെംപ്ലേറ്റായി പ്രവർത്തിക്കുന്നു, തുടർന്ന് ഡിഎൻഎ ശകലങ്ങളുടെ ക്രമം വലുപ്പമനുസരിച്ച് ഒരു ജെലിൽ അടുക്കുന്നു. സിന്തസിസ് സമയത്ത് ഡിഎൻഎയിൽ ഉൾപ്പെടുത്തുകയും പ്രതിപ്രവർത്തന ഉൽപ്പന്നങ്ങളുടെ തുടർന്നുള്ള ദൃശ്യവൽക്കരണം അനുവദിക്കുകയും ചെയ്യുന്ന ഓരോ ശകലവും ടെർമിനൽ ബേസുമായി ബന്ധപ്പെട്ട ഫ്ലൂറസെന്റ് ഡൈ ഉപയോഗിച്ച് ലേബൽ ചെയ്തിരിക്കുന്നു (ഇത് പേജ് 124-ൽ ചർച്ചചെയ്തു); അതിനാൽ, ഈ ശകലത്തിന്റെ ഫ്ലൂറസെൻസ് ഒരു നിശ്ചിത അടിത്തറയുടെ ഒരു ഐഡന്റിഫയർ ആയിരിക്കും. പ്രതികരണ ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ കണ്ടെത്തുകയും ദൃശ്യവൽക്കരിക്കുകയും ചെയ്യുക എന്നതാണ് അവശേഷിക്കുന്നത്. ഫലങ്ങൾ കമ്പ്യൂട്ടർ ഉപയോഗിച്ച് വിശകലനം ചെയ്യുകയും നാല് ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകൾക്ക് അനുയോജ്യമായ മൾട്ടി-കളർ പീക്കുകളുടെ ഒരു ശ്രേണിയായി അവതരിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. പിന്നീട് വിവരങ്ങൾ കമ്പ്യൂട്ടറിന്റെ ഇൻഫർമേഷൻ സിസ്റ്റത്തിലേക്ക് നേരിട്ട് കൈമാറ്റം ചെയ്യപ്പെടുന്നു, ഇത് സമയമെടുക്കുന്നതും ചിലപ്പോൾ വേദനാജനകവുമായ ഡാറ്റാ എൻട്രി പ്രക്രിയയെ ഇല്ലാതാക്കുന്നു, ഇത് ക്രമപ്പെടുത്തൽ വളരെ ബുദ്ധിമുട്ടാണ്.

» പുസ്തകത്തെക്കുറിച്ചുള്ള കൂടുതൽ വിവരങ്ങൾ ഇവിടെ കാണാം പ്രസാധകന്റെ വെബ്സൈറ്റ്
» ഉള്ളടക്ക പട്ടിക
» ഉദ്ധരണി

ഖബ്രോജിറ്റെലിക്ക് കൂപ്പൺ ഉപയോഗിച്ച് 25% കിഴിവ് - പിസിആർ

അവലംബം: www.habr.com