{"id":37174,"date":"2019-10-31T22:16:11","date_gmt":"2019-10-31T19:16:11","guid":{"rendered":"https:\/\/prohoster.info\/blog\/umer-nobelevskij-laureat-keri-mullis-izobretatel-polimeraznoj-tsepnoj-reaktsii-dnk\/"},"modified":"2019-10-31T22:16:11","modified_gmt":"2019-10-31T19:16:11","slug":"umer-nobelevskij-laureat-keri-mullis-izobretatel-polimeraznoj-tsepnoj-reaktsii-dnk","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/blog\/news\/umer-nobelevskij-laureat-keri-mullis-izobretatel-polimeraznoj-tsepnoj-reaktsii-dnk","title":{"rendered":"Zmar\u0142 laureat Nagrody Nobla Cary Mullis \u2014 wynalazca reakcji \u0142a\u0144cuchowej polimerazy DNA","gt_translate_keys":[{"key":"rendered","format":"text"}]},"content":{"rendered":"

\"Zmar\u0142 W Kalifornii w wieku 74 lat zmar\u0142 ameryka\u0144ski laureat Nagrody Nobla w dziedzinie chemii, Cary Mullis. Jak powiedzia\u0142a jego \u017cona, \u015bmier\u0107 nast\u0105pi\u0142a 7 sierpnia. Pow\u00f3d to niewydolno\u015b\u0107 serca i uk\u0142adu oddechowego spowodowana zapaleniem p\u0142uc.<\/p>\n

O tym, jaki wk\u0142ad wni\u00f3s\u0142 w biochemi\u0119 i za co otrzyma\u0142 Nagrod\u0119 Nobla, opowie nam sam James Watson \u2014 odkrywca cz\u0105steczki DNA. <\/p>\n

Fragment ksi\u0105\u017cki Jamesa Watsona, Andrew Barry'ego, Kevina Davisa <\/p>\n

DNA. Historia rewolucji genetycznej<\/h2>\n

Rozdzia\u0142 7. Ludzkie genom. Scenariusz \u017cycia<\/h3>\n

\n<\/a><\/noindex>
\n\u2026
\nReakcja \u0142a\u0144cuchowa polimerazy (PCR) zosta\u0142a wynaleziona w 1983 roku przez biochemika Cary'ego Mullisa, kt\u00f3ry pracowa\u0142 w firmie Cetus. Odkrycie tej reakcji by\u0142o bardzo znacz\u0105ce. Mullis wspomina\u0142 p\u00f3\u017aniej: \u201ePewnego pi\u0105tkowego wieczoru w kwietniu 1983 roku, o\u015bwieci\u0142o mnie. Jecha\u0142em, sun\u0105c po o\u015bwietlonej blaskiem ksi\u0119\u017cyca kr\u0119tej g\u00f3rskiej drodze w p\u00f3\u0142nocnej Kalifornii, w pobli\u017cu las\u00f3w sekwojowych\u201d. Imponuj\u0105ce, \u017ce w\u0142a\u015bnie w takiej sytuacji odwiedzi\u0142a go inspiracja. I nie chodzi wcale o to, \u017ce na p\u00f3\u0142nocy Kalifornii s\u0105 szczeg\u00f3lne drogi, kt\u00f3re sprzyjaj\u0105 ol\u015bnieniu; po prostu jego przyjaciel raz widzia\u0142, jak Mullis bezmy\u015blnie p\u0119dzi\u0142 po oblodzonej drodze z dwoma pasami ruchu i w og\u00f3le si\u0119 tym nie przejmowa\u0142. Przyjaciel powiedzia\u0142 New York Times: \u201eMullis widzia\u0142 w swoim umy\u015ble, \u017ce zginie, uderzaj\u0105c w sekwoj\u0119. Dlatego niczego si\u0119 nie boi za kierownic\u0105, je\u015bli przy drodze nie rosn\u0105 sekwoje\u201d. Obecno\u015b\u0107 sekwoi wzd\u0142u\u017c drogi zmusza\u0142a Mullisa do koncentracji i\u2026 oto, ol\u015bnienie. Za swoje wynalazki w 1993 roku Mullis otrzyma\u0142 Nagrod\u0119 Nobla w dziedzinie chemii i od tego czasu sta\u0142 si\u0119 jeszcze dziwniejszy w swoich czynach. Na przyk\u0142ad jest zwolennikiem rewizjonistycznej teorii, \u017ce AIDS nie jest zwi\u0105zane z HIV, co znacznie zaszkodzi\u0142o jego reputacji i zaszkodzi\u0142o lekarzom.<\/p>\n

PCR to do\u015b\u0107 prosta reakcja. Do jej przeprowadzenia potrzebujemy dw\u00f3ch chemiczniesyntetyzowanych starter\u00f3w, komplementarnych do przeciwnych ko\u0144c\u00f3w r\u00f3\u017cnych \u0142a\u0144cuch\u00f3w \u017c\u0105danego fragmentu DNA. Startery to kr\u00f3tkie odcinki jednoniciowego DNA, ka\u017cdy o d\u0142ugo\u015bci oko\u0142o 20 par zasad. Cech\u0105 starter\u00f3w jest to, \u017ce odpowiadaj\u0105 odcinkom DNA, kt\u00f3re nale\u017cy amplifikowa\u0107, czyli matrycy DNA. <\/p>\n

\"Zmar\u0142<\/a><\/noindex>
\n(Obrazek klikalny) Cary Mullis, wynalazca PCR<\/i><\/p>\n

Specyficzno\u015b\u0107 PCR opiera si\u0119 na tworzeniu komplementarnych kompleks\u00f3w mi\u0119dzy matryc\u0105 a primerami, kr\u00f3tkimi syntetycznymi oligonukleotydami. Ka\u017cdy z primer\u00f3w jest komplementarny do jednej z nici podw\u00f3jnej matrycy i ogranicza pocz\u0105tek i koniec amplifikowanego odcinka. Faktycznie uzyskana \"matryca\" stanowi integralny genom, a naszym celem jest wyizolowanie interesuj\u0105cych nas fragment\u00f3w. W tym celu podw\u00f3jna matryca DNA jest podgrzewana do 95 \u00b0C na kilka minut, aby nici DNA si\u0119 rozdzieli\u0142y. Ten etap nazywany jest denaturacj\u0105, poniewa\u017c wi\u0105zania wodorowe mi\u0119dzy dwiema ni\u0107mi DNA ulegaj\u0105 zniszczeniu. Kiedy nici si\u0119 rozdziel\u0105, obni\u017ca si\u0119 temperatur\u0119, aby primery mog\u0142y po\u0142\u0105czy\u0107 si\u0119 z jednoniciow\u0105 matryc\u0105. Polimeraza DNA zaczyna replikacj\u0119 DNA, \u0142\u0105cz\u0105c si\u0119 z odcinkiem nici nukleotyd\u00f3w. Enzym polimeraza DNA replikuje matrycow\u0105 ni\u0107, u\u017cywaj\u0105c primeru jako startera lub wzorca do kopiowania. W wyniku pierwszej p\u0119tli uzyskujemy wielokrotne sekwencyjne podwojenie okre\u015blonego odcinka DNA. Nast\u0119pnie powtarzamy t\u0119 procedur\u0119. Po ka\u017cdym cyklu uzyskujemy docelowy odcinek w podw\u00f3jnej ilo\u015bci. Po dwudziestu pi\u0119ciu cyklach PCR (czyli w mniej ni\u017c dwie godziny) mamy interesuj\u0105cy nas odcinek DNA w ilo\u015bci, kt\u00f3ra jest 225 razy wi\u0119ksza od pocz\u0105tkowej (czyli amplifikowali\u015bmy go oko\u0142o 34 miliony razy). W rzeczywisto\u015bci na wej\u015bciu otrzymywali\u015bmy mieszank\u0119 primer\u00f3w, matrycowego DNA, enzymu polimerazy DNA i wolnych zasad A, C, G i T; ilo\u015b\u0107 specyficznego produktu reakcji (ograniczonego primerami) ro\u015bnie wyk\u0142adniczo, podczas gdy ilo\u015b\u0107 \"d\u0142ugich\" kopii DNA ro\u015bnie liniowo, dlatego w produktach reakcji dominuje.<\/p>\n

\"Zmar\u0142
\nAmplifikacja potrzebnego odcinka DNA: reakcja \u0142a\u0144cuchowa polimerazy<\/i><\/p>\n

Na pocz\u0105tku wykorzystania PCR g\u0142\u00f3wnym problemem by\u0142o to, \u017ce po ka\u017cdym cyklu podgrzewania i ch\u0142odzenia konieczne by\u0142o dodanie do mieszaniny reakcyjnej polimerazy DNA, poniewa\u017c ulega\u0142a inaktywacji w temperaturze 95 \u00b0C. Dlatego trzeba j\u0105 by\u0142o dodawa\u0107 ponownie przed ka\u017cdym z 25 cykli. Procedura przeprowadzania reakcji by\u0142a stosunkowo ma\u0142o efektywna, wymaga\u0142a du\u017co czasu i drogiego enzymu polimerazy. Na szcz\u0119\u015bcie z pomoc\u0105 przysz\u0142a matka natura. Wiele zwierz\u0105t czuje si\u0119 komfortowo w temperaturach znacznie powy\u017cej 37 \u00b0C. Dlaczego ta liczba 37 \u00b0C sta\u0142a si\u0119 dla nas tak istotna? Poniewa\u017c temperatura ta jest optymalna dla E. coli, z kt\u00f3rej pocz\u0105tkowo pozyskiwano enzym polimeraz\u0119 do PCR. W naturze wyst\u0119puj\u0105 mikroorganizmy, kt\u00f3rych bia\u0142ka przez miliony lat naturalnej selekcji sta\u0142y si\u0119 bardziej odporne na dzia\u0142anie wysokich temperatur. Zaproponowano wykorzystanie polimeraz DNA z bakterii termofilnych. Te enzymy okaza\u0142y si\u0119 termostabilne i by\u0142y w stanie wytrzyma\u0107 wiele cykli reakcji. Ich u\u017cycie pozwoli\u0142o upro\u015bci\u0107 i zautomatyzowa\u0107 przeprowadzanie PCR. Jedna z pierwszych termostabilnych polimeraz DNA zosta\u0142a wyodr\u0119bniona z bakterii Thermus aquaticus, kt\u00f3ra \u017cyje w gor\u0105cych \u017ar\u00f3d\u0142ach Parku Narodowego Yellowstone i zosta\u0142a nazwana polimeraz\u0105 Taq.<\/p>\n

PCR szybko sta\u0142a si\u0119 g\u0142\u00f3wnym koniem roboczym projektu \u201eLudzkiego Genomu\u201d. W zasadzie proces nie r\u00f3\u017cni si\u0119 od tego opracowanego przez Mullisa, po prostu zosta\u0142 zautomatyzowany. Nie byli\u015bmy ju\u017c zale\u017cni od t\u0142umu niedowidz\u0105cych doktorant\u00f3w, skrupulatnie przelewaj\u0105cych krople cieczy do plastikowych prob\u00f3wek. W nowoczesnych laboratoriach zajmuj\u0105cych si\u0119 badaniami molekularno-genetycznymi prace te s\u0105 wykonywane na zrobotyzowanych liniach produkcyjnych. Roboty PCR, zaanga\u017cowane w tak ogromny projekt sekwencjonowania jak \u201eLudzki genom\u201d, nieustannie pracuj\u0105 z ogromnymi ilo\u015bciami termostabilnej polimerazy. Niekt\u00f3rzy naukowcy pracuj\u0105cy nad projektem \u201eLudzkiego Genomu\u201d byli oburzeni nieuzasadnionymi wysokimi op\u0142atami, kt\u00f3re dodaje do koszt\u00f3w materia\u0142\u00f3w eksploatacyjnych w\u0142a\u015bciciel patentu na PCR, europejski gigant przemys\u0142owo-farmaceutyczny Hoffmann-LaRoche.<\/p>\n

Innym \u201esilnikiem nap\u0119dowym\u201d by\u0142a sama metoda sekwencjonowania DNA. Chemiczna podstawa tej metody nie by\u0142a ju\u017c nowo\u015bci\u0105 w tamtych czasach: Mi\u0119dzynarodowy projekt \u201eLudzki genom\u201d (HGP) wykorzysta\u0142 t\u0119 sam\u0105 sprytn\u0105 metod\u0119, kt\u00f3r\u0105 opracowa\u0142 Fred Sanger w po\u0142owie lat 70. XX wieku. Innowacja polega\u0142a jednak na skali i stopniu automatyzacji, kt\u00f3re uda\u0142o si\u0119 osi\u0105gn\u0105\u0107 podczas sekwencjonowania.<\/p>\n

Automatyczne sekwencjonowanie pierwotnie by\u0142o opracowywane w laboratorium Lee Hooda w California Institute of Technology. Uko\u0144czy\u0142 szko\u0142\u0119 w stanie Montana i gra\u0142 w futbol ameryka\u0144ski na pozycji napastnika; dzi\u0119ki Hoodowi dru\u017cyna wielokrotnie zdobywa\u0142a mistrzostwo stanu. Umiej\u0119tno\u015bci pracy zespo\u0142owej przyda\u0142y mu si\u0119 r\u00f3wnie\u017c w karierze naukowej. W laboratorium Hooda pracowa\u0142a r\u00f3\u017cnorodna grupa chemik\u00f3w, biolog\u00f3w i in\u017cynier\u00f3w, a wkr\u00f3tce jego laboratorium sta\u0142o si\u0119 liderem w dziedzinie innowacji technologicznych.<\/p>\n

Metoda automatycznego sekwencjonowania zosta\u0142a w rzeczywisto\u015bci wynaleziona przez Lloyda Smitha i Mike'a Hunkapillera. Mike Hunkapiller, kt\u00f3ry w\u00f3wczas pracowa\u0142 w laboratorium Huda, zwr\u00f3ci\u0142 si\u0119 do Lloyda Smitha z propozycj\u0105 ulepszonej metody sekwencjonowania, w kt\u00f3rej zasady ka\u017cdego typu by\u0142yby barwione na inny kolor. Taki pomys\u0142 m\u00f3g\u0142by czterokrotnie zwi\u0119kszy\u0107 efektywno\u015b\u0107 procesu Sangera. W metodzie Sangera podczas sekwencjonowania w ka\u017cdej z czterech pr\u00f3b\u00f3wek (zgodnie z liczb\u0105 zasad) z pomoc\u0105 polimerazy DNA powstaje unikalny zestaw oligonukleotyd\u00f3w o r\u00f3\u017cnej d\u0142ugo\u015bci, zawieraj\u0105cych sekwencj\u0119 startera. Nast\u0119pnie do prob\u00f3wek dodawano formamid w celu rozdzielenia \u0142a\u0144cuch\u00f3w i przeprowadzano elektroforez\u0119 w \u017celu poliakrylamidowym na czterech \u015bcie\u017ckach. W wersji Smitha i Hunkapillera didesoksyrybonukleotydy oznaczano czterema r\u00f3\u017cnymi barwnikami, a PCR przeprowadzano w jednej prob\u00f3wce. Nast\u0119pnie podczas elektroforezy w \u017celu poliakrylamidowym laser o\u015bwietla\u0142 okre\u015blone miejsce \u017celu, co aktywowa\u0142o barwniki, a detektor okre\u015bla\u0142, kt\u00f3ry nukleotyd aktualnie migruje przez \u017cel. Pocz\u0105tkowo Smith by\u0142 pesymistycznie nastawiony \u2014 obawia\u0142 si\u0119, \u017ce u\u017cycie bardzo ma\u0142ych dawek barwnika spowoduje, i\u017c fragmenty nukleotydowe b\u0119d\u0105 niedostrzegalne. Jednak po doskona\u0142ym opanowaniu technologii laserowych wkr\u00f3tce znalaz\u0142 rozwi\u0105zanie, wykorzystuj\u0105c specjalne barwniki fluorochromowe, kt\u00f3re fluorescencj\u0105 odpowiadaj\u0105 na dzia\u0142anie promieniowania laserowego.<\/p>\n

\"Zmar\u0142
\n(Pe\u0142na wersja po klikni\u0119ciu<\/a><\/noindex> \u2014 4,08 MB) Ma\u0142ym drukiem: sekwencja DNA, zdekodowana za pomoc\u0105 automatycznego sekwenatora, uzyskana z urz\u0105dzenia do automatycznego sekwencjonowania. Ka\u017cdemu kolorowi odpowiada jedna z czterech zasad<\/i> <\/p>\n

W klasycznej wersji metody Sangera jedna z nici analizowanego DNA s\u0142u\u017cy jako matryca do syntezowania komplementarnej nici przez enzym DNA-polimeraz\u0119, a nast\u0119pnie sekwencje fragment\u00f3w DNA s\u0105 sortowane w \u017celu wed\u0142ug rozmiaru. Ka\u017cdy fragment, kt\u00f3ry wchodzi w sk\u0142ad DNA podczas syntezy i pozwala nast\u0119pnie wizualizowa\u0107 produkty reakcji, jest oznaczany fluorescencyjnym barwnikiem odpowiadaj\u0105cym ko\u0144cowemu nukleotydowi (czym zajmowano si\u0119 na str. 124); w zwi\u0105zku z tym fluorescencja tego fragmentu b\u0119dzie identyfikatorem dla danego nukleotydu. Nast\u0119pnie wystarczy przeprowadzi\u0107 detekcj\u0119 i wizualizowa\u0107 produkty reakcji. Wyniki analizuje si\u0119 za pomoc\u0105 komputera i przedstawia w postaci sekwencji wielokolorowych szczyt\u00f3w, kt\u00f3re odpowiadaj\u0105 czterem nukleotydom. Informacje s\u0105 nast\u0119pnie przesy\u0142ane bezpo\u015brednio do systemu informatycznego komputera, co eliminuje czasoch\u0142onny i czasem torturowany proces wprowadzania danych, kt\u00f3ry bardzo utrudnia\u0142 sekwencjonowanie.<\/p>\n

\u00bb Wi\u0119cej szczeg\u00f3\u0142\u00f3w o ksi\u0105\u017cce mo\u017cna znale\u017a\u0107 na stronie wydawcy<\/a><\/noindex>
\n\u00bb Spis tre\u015bci<\/a><\/noindex>
\n\u00bb Fragment<\/a><\/noindex><\/p>\n

Dla u\u017cytkownik\u00f3w Habr zni\u017cka 25% przy u\u017cyciu kuponu \u2014 PCR<\/b>
\n
\u0179r\u00f3d\u0142o: habr.com<\/a><\/p>","protected":false,"gt_translate_keys":[{"key":"rendered","format":"html"}]},"excerpt":{"rendered":"

\u0412 \u041a\u0430\u043b\u0438\u0444\u043e\u0440\u043d\u0438\u0438 \u0432 \u0432\u043e\u0437\u0440\u0430\u0441\u0442\u0435 74 \u043b\u0435\u0442 \u0443\u043c\u0435\u0440 \u0430\u043c\u0435\u0440\u0438\u043a\u0430\u043d\u0441\u043a\u0438\u0439 \u043d\u043e\u0431\u0435\u043b\u0435\u0432\u0441\u043a\u0438\u0439 \u043b\u0430\u0443\u0440\u0435\u0430\u0442 \u043f\u043e \u0445\u0438\u043c\u0438\u0438 \u041a\u044d\u0440\u0438 \u041c\u0443\u043b\u043b\u0438\u0441. \u041f\u043e \u0441\u043b\u043e\u0432\u0430\u043c \u0435\u0433\u043e \u0441\u0443\u043f\u0440\u0443\u0433\u0438, \u0441\u043c\u0435\u0440\u0442\u044c \u043d\u0430\u0441\u0442\u0443\u043f\u0438\u043b\u0430 7 \u0430\u0432\u0433\u0443\u0441\u0442\u0430. \u041f\u0440\u0438\u0447\u0438\u043d\u0430 \u2014 \u0441\u0435\u0440\u0434\u0435\u0447\u043d\u0430\u044f \u0438 \u0434\u044b\u0445\u0430\u0442\u0435\u043b\u044c\u043d\u0430\u044f \u043d\u0435\u0434\u043e\u0441\u0442\u0430\u0442\u043e\u0447\u043d\u043e\u0441\u0442\u044c \u0438\u0437-\u0437\u0430 \u043f\u043d\u0435\u0432\u043c\u043e\u043d\u0438\u0438. \u041e \u0442\u043e\u043c, \u043a\u0430\u043a\u043e\u0439 \u0432\u043a\u043b\u0430\u0434 \u043e\u043d \u0432\u043d\u0435\u0441 \u0432 \u0431\u0438\u043e\u0445\u0438\u043c\u0438\u044e \u0438 \u0437\u0430 \u0447\u0442\u043e \u043f\u043e\u043b\u0443\u0447\u0438\u043b \u041d\u043e\u0431\u0435\u043b\u0435\u0432\u0441\u043a\u0443\u044e \u043f\u0440\u0435\u043c\u0438\u044e, \u043d\u0430\u043c \u0440\u0430\u0441\u0441\u043a\u0430\u0436\u0435\u0442 \u0441\u0430\u043c \u0414\u0436\u0435\u0439\u043c\u0441 \u0423\u043e\u0442\u0441\u043e\u043d \u2014 \u043f\u0435\u0440\u0432\u043e\u043e\u0442\u043a\u0440\u044b\u0432\u0430\u0442\u0435\u043b\u044c \u043c\u043e\u043b\u0435\u043a\u0443\u043b\u044b \u0414\u041d\u041a. \u041e\u0442\u0440\u044b\u0432\u043e\u043a \u0438\u0437 […]<\/p>\n","protected":false,"gt_translate_keys":[{"key":"rendered","format":"html"}]},"author":1,"featured_media":27873,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"footnotes":""},"categories":[702],"tags":[],"class_list":["post-37174","post","type-post","status-publish","format-standard","has-post-thumbnail","hentry","category-news"],"aioseo_notices":[],"aioseo_head":"\n\t\t\n\t\n\t\n\t\n\t\n\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\n","aioseo_head_json":{"title":"\ud83e\udd47Zmar\u0142 laureat Nagrody Nobla Cary Mullis \u2014 wynalazca reakcji \u0142a\u0144cuchowej polimerazy DNA | ProHoster","description":"W Kalifornii.","canonical_url":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/blog\/news\/umer-nobelevskij-laureat-keri-mullis-izobretatel-polimeraznoj-tsepnoj-reaktsii-dnk","robots":"max-image-preview:large","keywords":"","webmasterTools":{"miscellaneous":""},"schema":null,"og:locale":"pl_PL","og:site_name":"ProHoster | \u041a\u0443\u043f\u0438\u0442\u044c \u043d\u0430\u0434\u0435\u0436\u043d\u044b\u0439 \u0445\u043e\u0441\u0442\u0438\u043d\u0433 \u0434\u043b\u044f \u0441\u0430\u0439\u0442\u043e\u0432 \u0441 \u0437\u0430\u0449\u0438\u0442\u043e\u0439 \u043e\u0442 DDoS, VPS VDS \u0441\u0435\u0440\u0432\u0435\u0440\u044b","og:type":"article","og:title":"\ud83e\udd47\u0423\u043c\u0435\u0440 \u043d\u043e\u0431\u0435\u043b\u0435\u0432\u0441\u043a\u0438\u0439 \u043b\u0430\u0443\u0440\u0435\u0430\u0442 \u041a\u044d\u0440\u0438 \u041c\u0443\u043b\u043b\u0438\u0441 \u2014 \u0438\u0437\u043e\u0431\u0440\u0435\u0442\u0430\u0442\u0435\u043b\u044c \u043f\u043e\u043b\u0438\u043c\u0435\u0440\u0430\u0437\u043d\u043e\u0439 \u0446\u0435\u043f\u043d\u043e\u0439 \u0440\u0435\u0430\u043a\u0446\u0438\u0438 \u0414\u041d\u041a | ProHoster","og:description":"\u0412 \u041a\u0430\u043b\u0438\u0444\u043e\u0440\u043d\u0438\u0438.","og:url":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/blog\/news\/umer-nobelevskij-laureat-keri-mullis-izobretatel-polimeraznoj-tsepnoj-reaktsii-dnk","og:image":"https:\/\/prohoster.info\/wp-content\/uploads\/2021\/11\/logo-350.jpg","og:image:secure_url":"https:\/\/prohoster.info\/wp-content\/uploads\/2021\/11\/logo-350.jpg","og:image:width":350,"og:image:height":350,"article:published_time":"2019-10-31T19:16:11+00:00","article:modified_time":"2019-10-31T19:16:11+00:00","article:publisher":"https:\/\/www.facebook.com\/prohoster","article:author":"https:\/\/www.facebook.com\/prohoster"},"aioseo_meta_data":{"post_id":"37174","title":null,"description":null,"keywords":null,"keyphrases":null,"primary_term":null,"canonical_url":null,"og_title":null,"og_description":null,"og_object_type":"default","og_image_type":"default","og_image_url":null,"og_image_width":null,"og_image_height":null,"og_image_custom_url":null,"og_image_custom_fields":null,"og_video":null,"og_custom_url":null,"og_article_section":null,"og_article_tags":null,"twitter_use_og":false,"twitter_card":"default","twitter_image_type":"default","twitter_image_url":null,"twitter_image_custom_url":null,"twitter_image_custom_fields":null,"twitter_title":null,"twitter_description":null,"schema":{"blockGraphs":[],"customGraphs":[],"default":{"data":{"Article":[],"Course":[],"Dataset":[],"FAQPage":[],"Movie":[],"Person":[],"Product":[],"ProductReview":[],"Car":[],"Recipe":[],"Service":[],"SoftwareApplication":[],"WebPage":[]},"graphName":"","isEnabled":true},"graphs":[]},"schema_type":null,"schema_type_options":null,"pillar_content":false,"robots_default":true,"robots_noindex":false,"robots_noarchive":false,"robots_nosnippet":false,"robots_nofollow":false,"robots_noimageindex":false,"robots_noodp":false,"robots_notranslate":false,"robots_max_snippet":null,"robots_max_videopreview":null,"robots_max_imagepreview":"large","priority":null,"frequency":null,"local_seo":null,"seo_analyzer_scan_date":"2026-01-22 06:26:23","breadcrumb_settings":null,"limit_modified_date":false,"reviewed_by":null,"ai":null,"created":"2021-03-01 01:32:13","updated":"2026-01-22 06:26:23","focus_keyword":null,"additional_keywords":null,"truseo_locale":null},"gt_translate_keys":[{"key":"link","format":"url"}],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/37174","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=37174"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/37174\/revisions"}],"wp:featuredmedia":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/media\/27873"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=37174"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=37174"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=37174"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}