{"id":37174,"date":"2019-10-31T22:16:11","date_gmt":"2019-10-31T19:16:11","guid":{"rendered":"https:\/\/prohoster.info\/blog\/umer-nobelevskij-laureat-keri-mullis-izobretatel-polimeraznoj-tsepnoj-reaktsii-dnk\/"},"modified":"2019-10-31T22:16:11","modified_gmt":"2019-10-31T19:16:11","slug":"umer-nobelevskij-laureat-keri-mullis-izobretatel-polimeraznoj-tsepnoj-reaktsii-dnk","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/blog\/news\/umer-nobelevskij-laureat-keri-mullis-izobretatel-polimeraznoj-tsepnoj-reaktsii-dnk","title":{"rendered":"Zmar\u0142 laureat Nagrody Nobla, Carey Mullis \u2014 wynalazca reakcji \u0142a\u0144cuchowej polimerazy DNA.","gt_translate_keys":[{"key":"rendered","format":"text"}]},"content":{"rendered":"

\"Zmar\u0142 W Kalifornii zmar\u0142 ameryka\u0144ski laureat Nagrody Nobla w dziedzinie chemii, Carey Mullis, w wieku 74 lat. Jak poinformowa\u0142a jego \u017cona, \u015bmier\u0107 nast\u0105pi\u0142a 7 sierpnia. Przyczyn\u0105 by\u0142a niewydolno\u015b\u0107 serca i uk\u0142adu oddechowego spowodowana zapaleniem p\u0142uc.<\/p>\n

O tym, jaki by\u0142 jego wk\u0142ad w biochemi\u0119 i za co otrzyma\u0142 Nagrod\u0119 Nobla, opowie nam sam James Watson \u2014 odkrywca moleku\u0142y DNA. <\/p>\n

Fragment ksi\u0105\u017cki autorstwa Jamesa Watsona, Andrew Berry, Kevina Davisa. <\/p>\n

DNA. Historia rewolucji genetycznej.<\/h2>\n

Rozdzia\u0142 7. Genom cz\u0142owieka. Scenariusz \u017cycia.<\/h3>\n

\n<\/a><\/noindex>
\n\u2026
\nReakcja \u0142a\u0144cuchowa polimerazy (PCR) zosta\u0142a wynaleziona w 1983 roku przez biochimika Kary'ego Mullisa, kt\u00f3ry pracowa\u0142 w firmie Cetus. Odkrycie tej reakcji by\u0142o niezwykle istotne. P\u00f3\u017aniej Mullis wspomina\u0142: \u201ePewnego pi\u0105tkowego wieczoru w kwietniu 1983 roku nagle mnie ol\u015bni\u0142o. Jecha\u0142em po o\u015bwietlonej ksi\u0119\u017cycem kr\u0119tej drodze g\u00f3rskiej w p\u00f3\u0142nocnej Kalifornii, w okolicy las\u00f3w sekwojowych\u201d. Ciekawe, \u017ce to w\u0142a\u015bnie w takiej sytuacji odwiedzi\u0142a go inspiracja. I wcale nie chodzi o to, \u017ce p\u00f3\u0142nocna Kalifornia ma specjalne drogi sprzyjaj\u0105ce ol\u015bnieniu; po prostu jego przyjaciel pewnego razu widzia\u0142, jak Mullis bezmy\u015blnie p\u0119dzi\u0142 po oblodzonej drodze z ruchem w obie strony, co wcale go nie przera\u017ca\u0142o. Przyjaciel powiedzia\u0142 New York Times: \u201eMullis widzia\u0142, \u017ce zginie, wje\u017cd\u017caj\u0105c w sekwoj\u0119. Dlatego niczego si\u0119 nie boi za kierownic\u0105, je\u015bli wzd\u0142u\u017c drogi nie rosn\u0105 sekwoje\u201d. Obecno\u015b\u0107 sekwoi wzd\u0142u\u017c drogi sprawia\u0142a, \u017ce Mullis koncentrowa\u0142 si\u0119 i\u2026 oto, ol\u015bnienie. Za swoje odkrycie w 1993 roku Mullis otrzyma\u0142 Nagrod\u0119 Nobla w dziedzinie chemii, a od tego czasu sta\u0142 si\u0119 jeszcze bardziej ekscentryczny w swoich dzia\u0142aniach. Na przyk\u0142ad, jest zwolennikiem rewizjonistycznej teorii, \u017ce AIDS nie jest zwi\u0105zane z HIV, co znacz\u0105co podwa\u017cy\u0142o jego reputacj\u0119 i utrudni\u0142o prac\u0119 lekarzom.<\/p>\n

PCR to do\u015b\u0107 prosta reakcja. Do jej przeprowadzenia potrzebujemy dw\u00f3ch chemicznie syntetyzowanych starter\u00f3w, komplementarnych do przeciwnych ko\u0144c\u00f3w r\u00f3\u017cnych nici wymaganego fragmentu DNA. Startery to kr\u00f3tkie fragmenty jednoniciowego DNA, ka\u017cdy o d\u0142ugo\u015bci oko\u0142o 20 par zasad. Cech\u0105 starter\u00f3w jest to, \u017ce odpowiadaj\u0105 fragmentom DNA, kt\u00f3re maj\u0105 zosta\u0107 amplifikowane, czyli matrycy DNA. <\/p>\n

\"Zmar\u0142<\/a><\/noindex>
\n(Obrazek jest klikany) Kary Mullis, wynalazca PCR<\/i><\/p>\n

Specyfika PCR polega na tworzeniu komplementarnych kompleks\u00f3w pomi\u0119dzy matryc\u0105 a primerami, kr\u00f3tkimi syntetycznymi oligonukleotydami. Ka\u017cdy z primer\u00f3w jest komplementarny do jednej z nici podw\u00f3jnej matrycy i wyznacza pocz\u0105tek oraz koniec amplifikowanego fragmentu. Uzyskana \"matryca\" to ca\u0142kowity genom, a naszym celem jest wydobycie interesuj\u0105cych nas fragment\u00f3w. Aby to osi\u0105gn\u0105\u0107, podw\u00f3jn\u0105 matryc\u0119 DNA podgrzewa si\u0119 do 95 \u00b0C na kilka minut, \u017ceby nici DNA si\u0119 rozdzieli\u0142y. Etap ten nazywa si\u0119 denaturacj\u0105, poniewa\u017c niszczone s\u0105 wi\u0105zania wodorowe pomi\u0119dzy dwiema ni\u0107mi DNA. Gdy nici si\u0119 rozdziel\u0105, temperatura zostaje obni\u017cona, aby primery mog\u0142y po\u0142\u0105czy\u0107 si\u0119 z jednoniciow\u0105 matryc\u0105. Polimeraza DNA rozpoczyna replikacj\u0119 DNA, \u0142\u0105cz\u0105c si\u0119 z fragmentem \u0142a\u0144cucha nukleotyd\u00f3w. Enzym polimeraza DNA replikuje \u0142a\u0144cuch matrycowy, u\u017cywaj\u0105c primera jako wskaz\u00f3wki lub przyk\u0142adu do kopiowania. W wyniku pierwszego cyklu otrzymujemy wielokrotne, sekwencyjne podwojenie okre\u015blonego fragmentu DNA. Nast\u0119pnie powtarzamy t\u0119 procedur\u0119. Po ka\u017cdym cyklu otrzymujemy celowy fragment w podw\u00f3jnej ilo\u015bci. Po dwudziestu pi\u0119ciu cyklach PCR (czyli mniej ni\u017c w ci\u0105gu dw\u00f3ch godzin) mamy interesuj\u0105cy nas fragment DNA w liczbie, kt\u00f3ra przekracza warto\u015b\u0107 pocz\u0105tkow\u0105 225 razy (to znaczy amplifikowali\u015bmy go oko\u0142o 34 miliony razy). W rzeczywisto\u015bci na wej\u015bciu mia\u0142a miejsce mieszanka primer\u00f3w, matrycowego DNA, enzymu polimerazy DNA i wolnych zasad A, C, G i T, przy czym ilo\u015b\u0107 specyficznego produktu reakcji (ograniczonego przez primery) wzrasta wyk\u0142adniczo, a ilo\u015b\u0107 \u201ed\u0142ugich\u201d kopii DNA liniowo, dlatego w produktach reakcji dominuje.<\/p>\n

\"Zmar\u0142
\nAmplifikacja wybranego fragmentu DNA: reakcja \u0142a\u0144cuchowa polimerazy<\/i><\/p>\n

Na pocz\u0105tku u\u017cywania PCR podstawowym problemem by\u0142o to, \u017ce po ka\u017cdym cyklu podgrzewania i sch\u0142adzania nale\u017ca\u0142o dodawa\u0107 do mieszaniny reakcyjnej DNA polimeraz\u0119, poniewa\u017c traci\u0142a aktywno\u015b\u0107 w temperaturze 95 \u00b0C. Dlatego trzeba by\u0142o dodawa\u0107 j\u0105 ponownie przed ka\u017cdym z 25 cykli. Procedura przeprowadzania reakcji by\u0142a stosunkowo nieefektywna, wymaga\u0142a du\u017co czasu i enzymu polimerazy, a materia\u0142 ten jest do\u015b\u0107 kosztowny. Na szcz\u0119\u015bcie matka natura przysz\u0142a z pomoc\u0105. Wiele zwierz\u0105t czuje si\u0119 komfortowo w znacznie wy\u017cszych temperaturach ni\u017c 37 \u00b0C. Dlaczego jednak warto\u015bci\u0105 37 \u00b0C sta\u0142a si\u0119 dla nas tak istotna? To dlatego, \u017ce ta temperatura jest optymalna dla E. coli, z kt\u00f3rej pierwotnie pozyskiwano enzym polimeraz\u0119 do PCR. W przyrodzie wyst\u0119puj\u0105 mikroorganizmy, kt\u00f3rych bia\u0142ka, na skutek milion\u00f3w lat doboru naturalnego, sta\u0142y si\u0119 bardziej odporne na dzia\u0142anie wysokich temperatur. Zaproponowano wykorzystanie DNA polimeraz z bakterii termofilnych. Enzymy te okaza\u0142y si\u0119 termostabilne i by\u0142y w stanie wytrzyma\u0107 wiele cykli reakcji. Ich zastosowanie pozwoli\u0142o upro\u015bci\u0107 i zautomatyzowa\u0107 przeprowadzanie PCR. Jedna z pierwszych termostabilnych DNA polimeraz zosta\u0142a wyizolowana z bakterii Thermus aquaticus, \u017cyj\u0105cej w gor\u0105cych \u017ar\u00f3d\u0142ach Parku Narodowego Yellowstone, i nazwano j\u0105 polimeraz\u0105 Taq.<\/p>\n

PCR szybko sta\u0142a si\u0119 kluczowym narz\u0119dziem w projekcie \u201eGenom cz\u0142owieka\u201d. Generalnie proces nie r\u00f3\u017cni si\u0119 od tego, kt\u00f3ry opracowa\u0142 Mullis, po prostu zosta\u0142 zautomatyzowany. Nie polegali\u015bmy ju\u017c na grupie niezdarnych doktorant\u00f3w, starannie przelewaj\u0105cych krople cieczy do plastikowych prob\u00f3wek. W nowoczesnych laboratoriach zajmuj\u0105cych si\u0119 badaniami molekularno-genetycznymi, ta praca wykonywana jest na zrobotyzowanych ta\u015bmach produkcyjnych. Roboty PCR zaanga\u017cowane w tak ogromny projekt jak \u201eGenom cz\u0142owieka\u201d nieustannie pracuj\u0105 z wielkimi ilo\u015bciami termostabilnej polimerazy. Niekt\u00f3rzy naukowcy pracuj\u0105cy nad projektem \u201eGenom cz\u0142owieka\u201d byli oburzeni nieuzasadnionymi wysokimi op\u0142atami, kt\u00f3re dodaje do kosztu materia\u0142\u00f3w eksploatacyjnych w\u0142a\u015bciciel patentu na PCR, europejski gigant przemys\u0142owo-farmaceutyczny Hoffmann-LaRoche.<\/p>\n

Innym \u00abnap\u0119dem\u00bb sta\u0142a si\u0119 sama metoda sekwencjonowania DNA. Chemiczna podstawa tej metody w\u00f3wczas nie by\u0142a nowo\u015bci\u0105: Mi\u0119dzynarodowy projekt \u201eLudzki genom\u201d (HGP) wykorzysta\u0142 t\u0119 sam\u0105 pomys\u0142ow\u0105 metod\u0119, kt\u00f3r\u0105 w po\u0142owie lat 70. opracowa\u0142 Fred Sanger. Innowacja polega\u0142a na skali i stopniu automatyzacji, kt\u00f3re uda\u0142o si\u0119 osi\u0105gn\u0105\u0107 podczas sekwencjonowania.<\/p>\n

Automatyczne sekwencjonowanie pierwotnie opracowywano w laboratorium Li Hooda w Kalifornijskim Instytucie Technologicznym. Uko\u0144czy\u0142 szko\u0142\u0119 w stanie Montana i gra\u0142 w futbol ameryka\u0144ski na pozycji napastnika; dzi\u0119ki Hoodowi dru\u017cyna wielokrotnie zdobywa\u0142a tytu\u0142 mistrza stanu. Umiej\u0119tno\u015bci zespo\u0142owej wsp\u00f3\u0142pracy przyda\u0142y mu si\u0119 tak\u017ce w karierze naukowej. W laboratorium Hooda pracowa\u0142a r\u00f3\u017cnorodna grupa chemik\u00f3w, biolog\u00f3w i in\u017cynier\u00f3w, a wkr\u00f3tce jego laboratorium sta\u0142o si\u0119 liderem w obszarze innowacji technologicznych.<\/p>\n

Faktycznie metod\u0119 automatycznego sekwencjonowania wynale\u017ali Lloyd Smith i Mike Hunkapiller. Mike Hunkapiller, kt\u00f3ry w\u00f3wczas pracowa\u0142 w laboratorium Huda, zwr\u00f3ci\u0142 si\u0119 do Lloyda Smitha z propozycj\u0105 udoskonalonej metody sekwencjonowania, w kt\u00f3rej zasady ka\u017cdego typu by\u0142yby kolorowane na inny kolor. Taki pomys\u0142 m\u00f3g\u0142by zwi\u0119kszy\u0107 wydajno\u015b\u0107 metody Sangera czterokrotnie. W metodzie Sangera w ka\u017cdej z czterech prob\u00f3wek (zgodnie z ilo\u015bci\u0105 zasad) w obecno\u015bci polimerazy DNA powstaje unikalny zestaw oligonukleotyd\u00f3w o r\u00f3\u017cnej d\u0142ugo\u015bci zawieraj\u0105cych sekwencj\u0119 primera. Nast\u0119pnie do prob\u00f3wek dodawano formamid w celu rozdzielenia \u0142a\u0144cuch\u00f3w i przeprowadzano elektroforez\u0119 w \u017celu poliakryamidowym na czterech \u015bcie\u017ckach. W wersji Smitha i Hunkapillera didesoksyrybonukleotydy znakowane s\u0105 czterema r\u00f3\u017cnymi barwnikami i PCR odbywa si\u0119 w jednej prob\u00f3wce. Nast\u0119pnie, podczas elektroforezy w \u017celu poliakryamidowym, wi\u0105zka lasera w okre\u015blonym miejscu \u017celu wzbudza aktywno\u015b\u0107 barwnik\u00f3w, a detektor okre\u015bla, kt\u00f3ry nukleotyd aktualnie migruje przez \u017cel. Na pocz\u0105tku Smith by\u0142 nastawiony pesymistycznie \u2014 obawia\u0142 si\u0119, \u017ce u\u017cycie ultra-ma\u0142ych dawek barwnika sprawi, \u017ce fragmenty nukleotydowe b\u0119d\u0105 nieczytelne. Jednak, doskonale znaj\u0105c technologie laserowe, szybko znalaz\u0142 rozwi\u0105zanie, u\u017cywaj\u0105c specjalnych fluorochromowych barwnik\u00f3w, kt\u00f3re fluorescencyjnie reaguj\u0105 na dzia\u0142anie promieniowania laserowego.<\/p>\n

\"Zmar\u0142
\n(Pe\u0142na wersja po klikni\u0119ciu<\/a><\/noindex> \u2014 4,08 MB) Ma\u0142ym drukiem: sekwencja DNA, zdekodowana za pomoc\u0105 automatycznego sekwenatora, uzyskana z urz\u0105dzenia do automatycznego sekwencjonowania. Ka\u017cdemu kolorowi odpowiada jedna z czterech zasad.<\/i> <\/p>\n

W klasycznej wersji metody Sangera jedna z nici analizowanego DNA pe\u0142ni rol\u0119 matrycy do syntezy komplementarnej nici przez enzym polimeraz\u0119 DNA, a nast\u0119pnie sekwencje fragment\u00f3w DNA s\u0105 sortowane w \u017celu wed\u0142ug rozmiaru. Ka\u017cdy fragment, kt\u00f3ry wchodzi w sk\u0142ad DNA w trakcie syntezy i pozwala na p\u00f3\u017aniejsze wizualizowanie produkt\u00f3w reakcji, jest oznaczany fluorescencyjnym barwnikiem odpowiadaj\u0105cym terminalnej zasadzie (o tym by\u0142o mowa na s. 124); w zwi\u0105zku z tym fluorescencja tego fragmentu stanie si\u0119 identyfikatorem dla danej zasady. Nast\u0119pnie nale\u017cy jedynie przeprowadzi\u0107 detekcj\u0119 i wizualizowa\u0107 produkty reakcji. Wyniki s\u0105 analizowane za pomoc\u0105 komputera i przedstawiaj\u0105 si\u0119 w postaci sekwencji kolorowych szczyt\u00f3w, odpowiadaj\u0105cych czterem nukleotydom. Informacje s\u0105 nast\u0119pnie bezpo\u015brednio przesy\u0142ane do systemu informacyjnego komputera, co eliminuje czasoch\u0142onny i czasami m\u0119cz\u0105cy proces wprowadzania danych, kt\u00f3ry znacznie komplikuje sekwencjonowanie.<\/p>\n

\u00bb Szczeg\u00f3\u0142owe informacje na temat ksi\u0105\u017cki mo\u017cna znale\u017a\u0107 na stronie wydawnictwa<\/a><\/noindex>
\n\u00bb Spis tre\u015bci<\/a><\/noindex>
\n\u00bb Fragment<\/a><\/noindex><\/p>\n

Dla Habrz mieszka\u0144c\u00f3w zni\u017cka 25% z kuponem \u2014 PCR<\/b>
\n
\u0179r\u00f3d\u0142o: habr.com<\/a><\/p>","protected":false,"gt_translate_keys":[{"key":"rendered","format":"html"}]},"excerpt":{"rendered":"

\u0412 \u041a\u0430\u043b\u0438\u0444\u043e\u0440\u043d\u0438\u0438 \u0432 \u0432\u043e\u0437\u0440\u0430\u0441\u0442\u0435 74 \u043b\u0435\u0442 \u0443\u043c\u0435\u0440 \u0430\u043c\u0435\u0440\u0438\u043a\u0430\u043d\u0441\u043a\u0438\u0439 \u043d\u043e\u0431\u0435\u043b\u0435\u0432\u0441\u043a\u0438\u0439 \u043b\u0430\u0443\u0440\u0435\u0430\u0442 \u043f\u043e \u0445\u0438\u043c\u0438\u0438 \u041a\u044d\u0440\u0438 \u041c\u0443\u043b\u043b\u0438\u0441. \u041f\u043e \u0441\u043b\u043e\u0432\u0430\u043c \u0435\u0433\u043e \u0441\u0443\u043f\u0440\u0443\u0433\u0438, \u0441\u043c\u0435\u0440\u0442\u044c \u043d\u0430\u0441\u0442\u0443\u043f\u0438\u043b\u0430 7 \u0430\u0432\u0433\u0443\u0441\u0442\u0430. \u041f\u0440\u0438\u0447\u0438\u043d\u0430 \u2014 \u0441\u0435\u0440\u0434\u0435\u0447\u043d\u0430\u044f \u0438 \u0434\u044b\u0445\u0430\u0442\u0435\u043b\u044c\u043d\u0430\u044f \u043d\u0435\u0434\u043e\u0441\u0442\u0430\u0442\u043e\u0447\u043d\u043e\u0441\u0442\u044c \u0438\u0437-\u0437\u0430 \u043f\u043d\u0435\u0432\u043c\u043e\u043d\u0438\u0438. \u041e \u0442\u043e\u043c, \u043a\u0430\u043a\u043e\u0439 \u0432\u043a\u043b\u0430\u0434 \u043e\u043d \u0432\u043d\u0435\u0441 \u0432 \u0431\u0438\u043e\u0445\u0438\u043c\u0438\u044e \u0438 \u0437\u0430 \u0447\u0442\u043e \u043f\u043e\u043b\u0443\u0447\u0438\u043b \u041d\u043e\u0431\u0435\u043b\u0435\u0432\u0441\u043a\u0443\u044e \u043f\u0440\u0435\u043c\u0438\u044e, \u043d\u0430\u043c \u0440\u0430\u0441\u0441\u043a\u0430\u0436\u0435\u0442 \u0441\u0430\u043c \u0414\u0436\u0435\u0439\u043c\u0441 \u0423\u043e\u0442\u0441\u043e\u043d \u2014 \u043f\u0435\u0440\u0432\u043e\u043e\u0442\u043a\u0440\u044b\u0432\u0430\u0442\u0435\u043b\u044c \u043c\u043e\u043b\u0435\u043a\u0443\u043b\u044b \u0414\u041d\u041a. \u041e\u0442\u0440\u044b\u0432\u043e\u043a \u0438\u0437 […]<\/p>\n","protected":false,"gt_translate_keys":[{"key":"rendered","format":"html"}]},"author":1,"featured_media":27873,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"footnotes":""},"categories":[702],"tags":[],"class_list":["post-37174","post","type-post","status-publish","format-standard","has-post-thumbnail","hentry","category-news"],"aioseo_notices":[],"aioseo_head":"\n\t\t\n\t\n\t\n\t\n\t\n\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\t\t\n\n","aioseo_head_json":{"title":"\ud83e\udd47Zmar\u0142 laureat Nobla Cary Mullis \u2014 wynalazca reakcji \u0142a\u0144cuchowej polimerazy DNA | ProHoster","description":"\u0412 \u041a\u0430\u043b\u0438\u0444\u043e\u0440\u043d\u0438\u0438.","canonical_url":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/blog\/news\/umer-nobelevskij-laureat-keri-mullis-izobretatel-polimeraznoj-tsepnoj-reaktsii-dnk","robots":"max-image-preview:large","keywords":"","webmasterTools":{"miscellaneous":""},"schema":null,"og:locale":"pl_PL","og:site_name":"ProHoster | \u041a\u0443\u043f\u0438\u0442\u044c \u043d\u0430\u0434\u0435\u0436\u043d\u044b\u0439 \u0445\u043e\u0441\u0442\u0438\u043d\u0433 \u0434\u043b\u044f \u0441\u0430\u0439\u0442\u043e\u0432 \u0441 \u0437\u0430\u0449\u0438\u0442\u043e\u0439 \u043e\u0442 DDoS, VPS VDS \u0441\u0435\u0440\u0432\u0435\u0440\u044b","og:type":"article","og:title":"\ud83e\udd47\u0423\u043c\u0435\u0440 \u043d\u043e\u0431\u0435\u043b\u0435\u0432\u0441\u043a\u0438\u0439 \u043b\u0430\u0443\u0440\u0435\u0430\u0442 \u041a\u044d\u0440\u0438 \u041c\u0443\u043b\u043b\u0438\u0441 \u2014 \u0438\u0437\u043e\u0431\u0440\u0435\u0442\u0430\u0442\u0435\u043b\u044c \u043f\u043e\u043b\u0438\u043c\u0435\u0440\u0430\u0437\u043d\u043e\u0439 \u0446\u0435\u043f\u043d\u043e\u0439 \u0440\u0435\u0430\u043a\u0446\u0438\u0438 \u0414\u041d\u041a | ProHoster","og:description":"\u0412 \u041a\u0430\u043b\u0438\u0444\u043e\u0440\u043d\u0438\u0438.","og:url":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/blog\/news\/umer-nobelevskij-laureat-keri-mullis-izobretatel-polimeraznoj-tsepnoj-reaktsii-dnk","og:image":"https:\/\/prohoster.info\/wp-content\/uploads\/2021\/11\/logo-350.jpg","og:image:secure_url":"https:\/\/prohoster.info\/wp-content\/uploads\/2021\/11\/logo-350.jpg","og:image:width":350,"og:image:height":350,"article:published_time":"2019-10-31T19:16:11+00:00","article:modified_time":"2019-10-31T19:16:11+00:00","article:publisher":"https:\/\/www.facebook.com\/prohoster","article:author":"https:\/\/www.facebook.com\/prohoster"},"aioseo_meta_data":{"post_id":"37174","title":null,"description":null,"keywords":null,"keyphrases":null,"primary_term":null,"canonical_url":null,"og_title":null,"og_description":null,"og_object_type":"default","og_image_type":"default","og_image_url":null,"og_image_width":null,"og_image_height":null,"og_image_custom_url":null,"og_image_custom_fields":null,"og_video":null,"og_custom_url":null,"og_article_section":null,"og_article_tags":null,"twitter_use_og":false,"twitter_card":"default","twitter_image_type":"default","twitter_image_url":null,"twitter_image_custom_url":null,"twitter_image_custom_fields":null,"twitter_title":null,"twitter_description":null,"schema":{"blockGraphs":[],"customGraphs":[],"default":{"data":{"Article":[],"Course":[],"Dataset":[],"FAQPage":[],"Movie":[],"Person":[],"Product":[],"ProductReview":[],"Car":[],"Recipe":[],"Service":[],"SoftwareApplication":[],"WebPage":[]},"graphName":"","isEnabled":true},"graphs":[]},"schema_type":null,"schema_type_options":null,"pillar_content":false,"robots_default":true,"robots_noindex":false,"robots_noarchive":false,"robots_nosnippet":false,"robots_nofollow":false,"robots_noimageindex":false,"robots_noodp":false,"robots_notranslate":false,"robots_max_snippet":null,"robots_max_videopreview":null,"robots_max_imagepreview":"large","priority":null,"frequency":null,"local_seo":null,"seo_analyzer_scan_date":"2026-01-22 06:26:23","breadcrumb_settings":null,"limit_modified_date":false,"reviewed_by":null,"ai":null,"created":"2021-03-01 01:32:13","updated":"2026-01-22 06:26:23","focus_keyword":null,"additional_keywords":null,"truseo_locale":null},"gt_translate_keys":[{"key":"link","format":"url"}],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/37174","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=37174"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/37174\/revisions"}],"wp:featuredmedia":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/media\/27873"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=37174"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=37174"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/prohoster.info\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=37174"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}