American Nobelius laureatus in chemia Kary Mullis mortuus est in California aetatis suae LXXIV. Iuxta uxorem suam mortem obvenit VII kalendas septembris. Causa est cor et defectum respiratorii ex peripneumonia.
James Watson ipse, repertor DNA moleculi, nobis narrabit de contributione biochemiae et pro qua Praemium Nobelianum accepit.
Excerpta ex libro Iacobi Watson, Andreae Berry, Kevin Davis
DNA. Historia Revolutionis Geneticae
Caput 7. Humanum genome. Vita sem
...
Catena reactionis polymerasis (PCR) reperta est anno 1983 ab biochemista Carey Mullis, quae apud Cetum laboravit. Inventio haec reactionis satis memorabilis fuit. Mullis postea recordatus est: "Veni vesperi mense Aprili 1983, epiphaniam habui. Post rotam eram, lunam impellens, via flexuosa in California septentrionali, terra silvae Rubrae. Grave est quod in tali casu afflatus eum percussit. Nec est quod septentrionalia Californiae speciales viae habent quae perspicientiam promovent; iustum est quod ille amicus quondam Mullis in via glaciali per biremium temere properantem vidit et illum omnino non vexavit. Amicus New York Times nuntiavit: "Mullis visionem habuit se moriturum in ligno rubicundo fragore. Nihil ergo timet dum impellit, nisi ligna rubentia in via nascantur. Praesentia redwoods per viam Mullis intendere coegit, et hic erat inscius. Mullis Praemium Nobelianum in Chemia ob suam inventionem anno 1993 accepit et quia in actionibus suis etiam peregrinus factus est. Exempli gratia, fautor est theoriae revisionistae quam AIDS HIV non affines esse, quae suam famam insigniter labefactarunt et doctores impediverunt.
PCR satis simplex est reactio. Ad eam perficiendam, opus est duobus primariis chemicis synthesis exaratis, quae ad finem oppositorum diversorum filorum fragmenti debiti DNA complent. Primarii breves sectiones sunt DNA simplicibus subductis, singulae binae circiter 20 bases longitudinis. Proprietas primariorum est quod correspondent sectionibus DNA quae ampliandi opus est, id est DNA template.
(Imago clickable) Kary Mullis, inventor PCR
Proprietas PCR fundatur in complexionibus complementariis formationis inter templates et primarios, breves syntheticas oligonucleotidas. Unusquisque primarius est complementarius uni e canalibus templates duplicis et limites amplificatae regionis principium et finem. Re quidem vera, inde "matrix" totum genome est, et propositum est nobis ab ea usurarum fragmenta segregare. Ad hoc faciendum, subductis DNA templates calefit ad 95 Β°C aliquot minutas ad fila DNA dividendas. Haec scena denaturation appellatur quia vincula hydrogenii inter duas fila DNA rumpuntur. Postquam fila separaverunt, temperatura demissa est ut primers ligare ad unicum exemplum subductis permitteret. DNA polymerasis DNA replicationem incipit ligando ad tractum catenae nucleotidis. Enzyme DNA polymerasis replicat litium Formulae utens primario vel primario vel exemplo ad describendum. Ex primo cyclo consequimur plures sequentes duplicationem sectionis cuiusdam DNA. Deinde iteramus hanc rationem. Post quemlibet cyclum scopum obtinemus in quantitate dupla. Post cyclos vigintiquinque PCR (id est in duabus horis minus), habemus DNA usuram nobis in moles 225 partibus altiori originali (hoc est, eam circiter 34 decies centena millia ampliavi). Re quidem vera, in inputa nobis mixtura primariorum, template DNA, enzyme DNA polymerasi et basibus liberae A, C, G, T, moles specificae producti reactionis (a primers terminatae) auget exponentialiter et numerus of "longi" DNA in exemplaribus linearibus est, ergo in reactione producta dominatur.
Amplificatio sectionis desiderati DNA: reactionem catenae polymerase
Primis diebus PCR, quaestio principalis haec fuit: post unumquemque cyclum calefactivum refrigerium, DNA polymerasis addita est reactioni mixtionis, cum inactivated ad temperiem 95Β°C. Oportuit igitur ante singulas 25 circuitus illud addere. Reactio processus relative inhabilis erat, multum temporis et polymerase enzyme requirebat, et materia valde pretiosa erat. Feliciter natura parens succurrit. Multa animalia in temperaturis multo plus quam 37 Β°C commoda sentiunt. 37 Β°F Hoc factum est, quia haec temperatura optima est pro E. colio, ex quo polymerasium enzyme in PCR principio consecutum est. In natura microorganismi sunt, quorum servo, plus decies centena millia annorum delectu naturalium temperaturis calidis magis repugnant. Propositum est polymerasibus DNA ex bacteria thermophilica uti. Hae enzymes evaserunt ut thermostae et multas motus cyclos sustinere potuerunt. Earum usus effecit ut pcr simpliciorem ac automatarium simpliciorem redderet. Una e primis polymerases thermostabiles DNA a bacterio Thermus aquaticus solitarius fuit, quae in calidis fontibus National Park Yellowstone habitat, et Taq polymerase nominata est.
PCR cito officina Humani Genome Project factus est. In universum non differt processus ab eo qui a Mullis evolvitur, mox automated est. Non iam dependens eramus in turba discipulorum lepidi excordes sedulo fundentes stillulas liquoris in tubulis testi plasticis. In recentioribus laboratorios perficiendo investigationem geneticam hypotheticam, hoc opus exercetur in vectoribus roboticis. PCR robots implicatos in sequendo project tam magnas quam Genome Humanum cum ingentibus voluminibus polymerorum caloris stabilis implacabile est. Nonnulli phisici in Humano Genome Project laborantes ab inrationabiliter regalia alta addiderunt sumptus consumabilium a possessore PCR patentium, gigantis Hoffmann-LaRoche pharmaceuticae industrialis Europaeae.
Aliud "principium agens" erat ipsum DNA modum sequendi. Fundamentum chemicum huius methodi iam tunc novum non erat: Humanum Genome Project Interstate (HGP) eandem methodum ingeniosam adoptavit quam Fred Sanger in medio annorum 1970 elaboravit. Innovatio in scala et gradu automationis iacebat quam sequelam consequi poterat.
Automatum sequencia primum in laboratorio Lee Hood apud Californiae Institutum Technologiae elaboratum est. Scholam altam in Montana frequentavit et collegium quadrantem ad pediludium egit; Gratias Hood, turma civitatis patrocinium plus semel vicit. Eius solers activitates etiam accesserunt in manus suas in curriculo scientifico. Laboratorium cucullo fusili turba chemicorum, biologorum et fabrum est stipatum, et laboratorium eius mox princeps factus est in innovatione technologica.
Re quidem vera ratio sequendi automata inventa ab Lloyd Smith et Mike Hunkapiller. Mike Hunkapiller, tunc in laboratorio Hood laborans, Lloyd Smith accessit cum rogatione ad meliorem sequendi methodum in qua singulae basis species aliter coloratae essent. Talis idea quadruplicare poterat processus Sanger efficientiam. In Sanger, cum in singulis quattuor tubis (secundum numerum bases), concurrente DNA polymerase, una copia oligonucleotidum diversarum longitudinum formatur, inclusa prima serie. Deinde formamide tubulis appositam pro catena separationis et polyacrylamide gel electrophoresis in quattuor vicis fiebat. In Smith et Hunkapiller versione dideoxynucleotides intitulatae sunt cum quattuor tincturis diversis et PCR in uno tubo conficitur. Deinde, in polyacrylamide gel electrophoresis, trabs laser in loco certo gel excitat activitatem tincturarum, et detector determinat quem nucleotide nunc per gel migrat. Primo, Smith erat pessimam - verebatur ne per ultra-low doses tincturas indiscretas regiones nucleotidas induceret. Tamen, technologiae laseris intellegentiam praestantem, mox exitum e situ invenit utendo fluorochromi tingui speciali fluorescentis cum expositae radiorum laseris.
(Plenus version - 4,08 MB) Fine print: DNA sequentia consecuta utens schedula latae sententiae, consecuta e machina automatic sequentis. Quisque color respondet uni quattuor basibus
In classica methodo Sanger versio, una e stamina DNA enucleata agit ut exemplum synthesis litui complementarii per enzyme DNA polymerase, tum series DNA fragmentorum in gel magnitudine sortitur. Quodlibet fragmentum, quod in synthesi DNA comprehenditur et subsequentem visualizationem reactionis productorum concedit, intitulatum cum tinctura fluorescenti basi terminali respondente (de quo supra pag. 124 dictum est); ergo fluorescens hujus fragmenti erit basis data identificatrix. Tunc omnia quae supersunt, deprehendere et visualizare reactionem productorum est facere. Eventus a computatro explicantur et in serie cacumina multicolorum quattuor nucleotidis respondentium exhibentur. Informatio dein directe ad systematis informationis computatrum transfertur, tempus consumens removens et interdum processus notitiae molestae, qui difficillimum sequelam reddebat.
Β» Pro maiori de libro, quaeso, visita
Β»
Β»
Nam Khabrozhiteli XXV% discount in coupon - PCR
Source: www.habr.com